1.  10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。

2.  收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反复冻融。

3.  标准品液配制：取8个1.5ml离心管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入标准品溶液100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出500ul，移至第二管。

     如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出500ul弃去。第八管为空白对照。        

4.  洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）。

1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃40分钟。

2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。

3.  每孔加入蒸馏水和第一抗体工作液各50ul(空白除外)。将反应板充分混匀后置37℃20分钟。

4.  洗板：同前。            

5.  每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃10分钟。

6.  洗板：同前。

7.  每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。

8.  每孔加入100ul终止液混匀。

9.  30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。

1.  所有OD值建议减除空白值后再行计算。如空白OD低于0.1，也可以直接计算。

2.  以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，使用软件作图，画出标准曲线。

3.  根据样品OD值计算出相应含量即可。绘图软件可在本网站技术资讯下载或向本公司邮件索取。

1.   以上标准孔及待测样品均建议做复孔，每次测定应同时做标准曲线。

2.   洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。

3.   检测时所有试剂都要恢复到室温。板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。

4.   试剂盒使用超敏TMB溶液，若显色过深会出现絮状物，属正常现象，不影响结果判读。

5.   说明书中试剂盒组成为96T的量，48T的量应减半!